Avaliação da biocompatibilidade do selante de canal radicular Epiphany em tecidos subcutâneos de ratos

Objetivo. O objetivo deste estudo foi avaliar a biocompatibilidade do selante de canal radicular Epiphany nos tecidos subcutâneos de ratos.

Desenho do estudo. Tubos de polietileno foram preenchidos com o selante (I: Epiphany; II: Epiphany fotoativado; III: Epiphany associado a primer autocondicionante; IV: Epiphany fotoativado associado a primer; e V: grupo controle) e posteriormente implantados em 4 regiões diferentes do dorso de 15 ratos machos adultos (Rattus novergicus, Albinus Wistar). Após 7, 21 e 42 dias, 5 animais foram sacrificados, obtendo 4 amostras por grupo, além do grupo controle, em cada tempo analisado.

Resultados. Em todos os períodos, o Epiphany induziu uma leve reação inflamatória. No entanto, no grupo II, no qual o primer não foi utilizado, necrose extensa e uma reação inflamatória moderada a intensa foram observadas, principalmente após 7 e 21 dias.

Conclusão. O selante Epiphany parece ser biocompatível quando testado em tecidos subcutâneos de ratos.

Vários estudos foram realizados para avaliar a biocompatibilidade dos selantes de canal radicular, essenciais para garantir seu bom desempenho e sucesso no tratamento endodôntico. Para avaliar a resposta biológica e o potencial irritante de novos materiais endodônticos introduzidos no mercado, estudos preliminares utilizando métodos experimentais in vivo, como a implantação desses materiais no tecido conjuntivo de animais de laboratório, são comumente realizados.

Entre os novos sistemas de obturação de canal radicular recentemente introduzidos está o Resilon-Epiphany. Resilon é um polímero sintético de policaprolactona, baseado em um polímero à base de poliéster que contém dimetacrilatos, que podem se ligar a selantes de resina à base de metacrilato, como o Epiphany, um selante de canal radicular de cura dupla à base de resina. De acordo com o fabricante, o Resilon também contém vidro bioativo, hidróxido de cálcio e carga radiopaca. Alguns investigadores relataram maior capacidade de selagem deste sistema do que outros materiais e que está associado a menos periodontite apical. No entanto, em outro estudo, a resistência interfacial obtida com este sistema para a dentina intraradicular não foi superior à da guta-percha associada a um selante de resina epóxi. O sistema Resilon-Epiphany também é seguido por um primer autocondicionante que contém monômero funcional terminado em ácido sulfônico, HEMA, água e iniciador de polimerização. O uso do Resilon associado ao selante Epiphany fornece uma das principais características deste sistema, que foi sugerido ter a capacidade de produzir um preenchimento monobloco colado.

Embora o selante de canal radicular Epiphany tenha sido aprovado para uso endodôntico pela Food and Drug Administration (FDA) nos EUA, há muito poucos estudos publicados avaliando sua biocompatibilidade e citotoxicidade e sua associação com o primer autocondicionante que o acompanha. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar a biocompatibilidade do selante de canal radicular Epiphany, associado ou não ao primer, em tecidos conectivos subcutâneos de ratos e comparar os resultados com os de estudos anteriores.

Material e métodos

Este estudo foi avaliado e aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal da Universidade de Ribeirão Preto, São Paulo, Brasil, e os conceitos éticos para uso de animais de laboratório foram observados em todas as fases do experimento. O material avaliado foi o selante de canal radicular Epiphany (Pentron-Clinical Technologies, Wallingford, CT), que foi associado ou não ao primer autocondicionante. De acordo com essa associação do selante testado, foram estabelecidos os seguintes 4 grupos experimentais (e 1 grupo controle): grupo I: Epiphany; grupo II: Epiphany fotoativado; grupo III: Epiphany associado ao primer autocondicionante; grupo IV: Epiphany fotoativado associado ao primer autocondicionante; e grupo V: controle, com tubo vazio.

Para o estudo, foram utilizados 15 ratos machos adultos (Rattus novergicus, Albinus Wistar) pesando entre 200 e 250 g. Eles foram mantidos em uma sala aclimatizada e receberam uma dieta balanceada e água ad libitum. Os animais foram anestesiados por injeção intramuscular de cloridrato de cetamina (0,1 mg/mL) associado à xilazina (0,05 mg/mL), seguido do corte do pelo dorsal, desinfecção, incisão e dissecação do tecido subcutâneo para inserir o material de teste. Para implantar o selante de canal radicular nos tecidos subcutâneos do rato, foram utilizados tubos de polietileno esterilizados com 1,2 mm de diâmetro (0,8 mm de diâmetro interno) e 10 mm de comprimento. Para evitar que o selante escapasse, uma das extremidades dos tubos foi fechada por calor. O selante de canal radicular Epiphany foi manipulado de acordo com a recomendação do fabricante para uso clínico, em uma sala escura, pois é um selante de cura dupla. Nos grupos III e IV, um pincel foi utilizado para revestir a superfície interna dos tubos de polietileno com o primer fornecido com o selante. O selante manipulado foi cuidadosamente colocado nos tubos de polietileno com a ajuda de um cone de papel compatível com o diâmetro dos tubos, garantindo que não houvesse espaços vazios e que o selante não transbordasse. Em seguida, o selante nos tubos foi ativado por luz (grupos II e IV) e imediatamente implantado no tecido subcutâneo nas dorsas dos ratos. As feridas cirúrgicas foram suturadas.

Cada animal recebeu 4 tubos com material, 2 na região escapular e 2 na região pélvica (um do lado direito e o outro do lado esquerdo), cada tubo representando um grupo distinto. Após 7, 21 e 42 dias, os ratos foram mortos por overdose anestésica e os tubos removidos para análise histológica. Assim, havia 5 ratos para cada período de estudo, 4 deles representando os grupos experimentais e 1 o grupo controle (grupo V), totalizando 4 amostras para cada grupo experimental em cada um dos períodos. Os espécimes foram fixados em solução de formalina tamponada a 10% por 24 h e processados para exame histológico convencional.

O tecido conjuntivo adjacente à extremidade aberta de cada tubo foi cortado em um micrótomo com espessura de 5 µm, corado com hematoxilina e eosina, e avaliado quanto à presença ou ausência de leucócitos neutrofílicos, macrófagos, linfócitos, células plasmáticas, células gigantes de corpo estranho, material disperso e tecido necrótico. Cada critério foi avaliado como ausente (—), leve (+), moderado (++) e intenso (+++). Dependendo dessas características, exceto a presença de material disperso, a reação inflamatória do tecido conjuntivo foi classificada como nenhuma a leve (grau I), moderada (grau II) e severa (grau III), de acordo com os critérios descritos por Shahi et al.

Resultados

Além do 1 espécime utilizado como controle em cada período de estudo, a resposta do tecido conjuntivo ao longo da parede lateral fora dos tubos de polietileno de todos os espécimes serviu como um controle negativo para a técnica. Foi possível observar uma fina camada de tecido conjuntivo, sem reação inflamatória, entre a parede do tubo e o tecido adjacente em todos os espécimes, em todos os períodos de estudo. O tecido conjuntivo adjacente à extremidade aberta do tubo de polietileno foi avaliado, e uma análise descritiva dos achados histológicos foi realizada. Os dados obtidos estão resumidos na Tabela I.

Resultados de sete dias

Grupo I (Epifania). Na área avaliada, foi observada uma camada de tecido conjuntivo celularizado que apresentava leve reação inflamatória crônica, predominantemente formada por linfócitos e vasos sanguíneos hiperêmicos (Fig. 1). Também foram notados escassos leucócitos neutrofílicos e pequeno foco de necrose. Nenhum macrófago ou células gigantes multinucleadas de corpo estranho foram observados. Além disso, havia material disperso caracterizado por um material amorfo, difuso, granular, de cor preta.

Grupo II (Epiphany fotoativado). Após 7 dias, o tecido subcutâneo deste grupo apresentou reação inflamatória crônica moderada a intensa, com extensa necrose (Fig. 2). Nenhuma atividade fagocítica foi observada.

Grupo III (Epiphany associado ao primer). As características histológicas foram semelhantes às encontradas no grupo I (Epiphany).

Grupo IV (Epiphany fotoativado associado ao primer). As características histológicas foram semelhantes às encontradas no grupo I (Epiphany).

Resultados de 21 dias

Grupo I (Epiphany). No tecido conjuntivo adjacente à extremidade aberta do tubo, houve uma leve reação inflamatória crônica, predominantemente linfocítica. Nenhuma célula gigante multinucleada de corpo estranho e macrófagos foram observados. Material disperso foi encontrado em grande quantidade. Focos escassos de necrose também foram notados.

Grupo II (Epiphany fotoativado). Em contraste com todos os outros grupos deste mesmo período, o tecido conjuntivo adjacente ao selante de canal radicular apresentou uma intensa reação inflamatória crônica, associada a vários vasos sanguíneos hiperêmicos. Extensa necrose foi observada ao lado do material disperso, que foi visto em abundância.

Grupo III (Epiphany associado ao primer). O tecido conjuntivo localizado na extremidade aberta do tubo apresentou uma leve inflamação crônica, predominantemente formada por linfócitos. Células gigantes de corpo estranho e macrófagos estavam ausentes. Material residual disperso foi notado em grande quantidade. Nenhuma necrose ou quaisquer alterações degenerativas foram observadas.

Grupo IV (Epiphany fotoativado associado ao primer). Este grupo apresentou características histológicas semelhantes ao grupo I neste mesmo período, com leve inflamação crônica, pequenos focos de necrose e material residual disperso em áreas extensas (Fig. 3).

Resultados de 42 dias

Grupo I (Epiphany). Neste grupo, havia tecido conjuntivo que apresentava uma reação inflamatória crônica leve a ausente, com pouco selante residual disperso. Não houve necrose ou quaisquer outras alterações.

Grupo II (Epiphany fotoativado). Diferente das características encontradas no grupo I neste mesmo período, houve uma inflamação crônica moderada, associada a alguns vasos sanguíneos congestionados. Focos de necrose ainda foram observados adjacentes ao selante residual disperso.

Grupo III (Epiphany associado ao primer). Houve uma reação inflamatória crônica leve a ausente, sem células gigantes de corpo estranho ou macrófagos. Foi observado algum material disperso. Semelhante ao grupo I neste mesmo período, não foram observadas necrose ou outras alterações degenerativas.

Grupo IV (Epiphany fotoativado associado ao primer). As características histológicas foram semelhantes ao grupo III neste mesmo período.

Discussão

A guta-percha tem sido o material mais comumente utilizado para obturar o sistema de canal radicular, embora não seja considerado o material ideal para preenchimento de canal radicular. Uma de suas desvantagens é a necessidade de usar um selante de canal radicular com boas propriedades de selagem. Além disso, quando a restauração coronária é inadequada ou ausente, a saliva pode dissolver o selante de canal radicular, levando à reinfecção e, consequentemente, a um tratamento endodôntico malsucedido. Entre os selantes de canal radicular atualmente utilizados na prática odontológica, existem alguns compostos de hidróxido de cálcio, ionômero de vidro, óxido de zinco–eugenol e silicones, e alguns são à base de resina.

Recentemente, um novo sistema de obturação de canal radicular foi introduzido no mercado e se tornou popular entre dentistas endodontistas e gerais. Este sistema é composto por um polímero sintético de policaprolactona, Resilon, associado a um selante de canal radicular de cura dupla à base de resina, Epiphany. O sistema Resilon-Epiphany é dito formar rapidamente um preenchimento "monobloco" que se liga à parede dentinária no canal radicular. De acordo com o fabricante, o Epiphany não é citotóxico, é biocompatível e não mutagênico, e foi aprovado pela FDA para uso endodôntico.

Em qualquer sistema de preenchimento de canal radicular, o selante pode escapar para a região periapical em casos de sobrepreenchimento. Se o selante causar uma reação inflamatória crônica de corpo estranho, isso pode induzir a persistência da periodontite apical. Embora o fabricante postule que o Epiphany é biocompatível, há poucos estudos que avaliaram sua biocompatibilidade e citotoxicidade. Além disso, os experimentos apresentam resultados conflitantes. Embora não haja estudos anteriores avaliando a biocompatibilidade do selante de canal radicular Epiphany associado ao primer autocondicionante, um estudo recente avaliou a citotoxicidade apenas do primer. No presente estudo, os resultados obtidos na maioria dos grupos mostraram uma boa resposta biológica. Alguns autores relataram achados semelhantes, mas não utilizaram o primer autocondicionante. O selante de canal radicular Epiphany tem uma alta liberação de cálcio. Essa característica causa um pH mais alcalino no local do tecido, o que pode favorecer a reparação do tecido. Outros autores, no entanto, observaram que o Epiphany é mais citotóxico do que outros selantes convencionais. No presente estudo, a resposta biológica foi menos favorável no grupo II (Epiphany fotoativado) em comparação com os outros grupos: o tecido conjuntivo adjacente ao material apresentou reação inflamatória crônica moderada a intensa e necrose extensa após 7 e 21 dias. Essa inflamação intensa diminuiu após 42 dias. O selante foi ativado por luz neste grupo, mas o primer autocondicionante não foi utilizado. Sob essa condição, o Epiphany poderia eventualmente apresentar produtos de reação irritantes, possivelmente monômeros livres, na superfície em contato com o tecido conjuntivo. Assim, parece que quando o primer não é utilizado, esses produtos de reação possivelmente tóxicos promovem uma resposta biológica menos favorável.

Apesar dos bons resultados obtidos na maioria dos grupos no presente estudo, houve uma irritação tecidual severa observada no grupo II. Como poucos estudos foram realizados até agora, mais pesquisas são necessárias para avaliar completamente a resposta biológica e a citotoxicidade deste selante. Do ponto de vista biológico, a resposta após o uso do primer autocondicionante requer mais investigações.

Autores: Mônica Maria Denadae de Campos-Pinto, Danilo Alessandro de Oliveira, Marco Aurélio Versiani, Yara Teresinha Correa Silva-Sousa, Manoel Damião de Sousa-Neto, Danyel Elias da Cruz Perez

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